手足口EV71-IgM抗體快速檢測(cè)試劑盒

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 手足口EV71-IgM抗體快速檢測(cè)試劑盒

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1.連鎖信電場(chǎng)凝膠電泳嘅DNA樣品嘅制備
為逃過大分子DNA喺提取過程中斷裂，細(xì)胞使喺瓊脂糖凝膠蚊中進(jìn)行原位裂解，喺本實(shí)驗(yàn)中，我哋使用金黃色菩提子球菌（StapHylococcus aureus）作為例子。
1）攞100mL對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期金黃色菩提子球菌細(xì)胞于4℃，5000g離心5min。
2）用20mL TEN緩沖液沖洗沉淀，同樣條件離心5min。之后用10mL EC緩沖液令細(xì)胞懸浮。
3）攞1.5mL細(xì)胞樣品與相同體積含2%SeaPLaque瓊脂糖嘅EC緩沖液快手撈撈勻并等分流溶液至封閉嘅糢塊中于4℃凝固，撈前加熱至瓊脂糖熔解并冷卻到五十℃。
4）對(duì)于，每個(gè)菌株，要15～二十個(gè)凝膠蚊，將佢哋擺到含有30～9個(gè)μg/mL RNase（50mL嘅10mg/mL嘅RNase）嘅10mL EC緩沖液中，于37℃振浪過夜。
5）去掉裂解緩沖液，換為10mL ESP緩沖液于五十℃輕度振浪溫育48h。
6）將凝膠蚊擺喺10mL含有174μg/mL苯甲基huang xian氟（PMSF）嘅TE緩沖液中，室溫溫育4h（2h換液一次），以滅生ESP中嘅蛋白酶K。
7）用TE清洗瓊脂蚊6h（2h換液一次），置于TE中4℃保存。
2.制酵素消化
提高PFGE嘅分辯率決于100～1000kb片段電泳結(jié)果嘅重復(fù)率，佢同酵素切關(guān)系密切，可喺瓊脂糖凝膠蚊中使用啱嘅內(nèi)切酶消化。
1）25μL10×反應(yīng)緩沖液，30U制酵素，加對(duì)蒸水至250μL撈勻。
2）攞個(gè)凝膠蚊置其中，啱溫度下溫育過夜（按內(nèi)切酶要求）后，用TE緩沖液洗滌并貯存。
3.應(yīng)用PFGE對(duì)樣品DNA進(jìn)行分析
1）用0.5×TBE緩沖液制備一個(gè)0.8%SeakemHGT瓊脂糖凝膠，膠嘅厚度盡量唔關(guān)樣品凝膠蚊相符。若用Wide Minisub Cell進(jìn)行電泳嘅話，50mL應(yīng)該溶液即可。
2）膠凝后，因住移去樣品呀。將凝膠蚊用刀切開與加樣窿*嘅大細(xì)，將呀心呀插入加樣窿，逃過惹氣泡。（若樣品喺溶液中，以l:1嘅比率與五十℃2%Seaplaque瓊脂糖相撈，快手系度注入加樣孔中）。